靶細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)：LDH法

更新時(shí)間：2021-07-13

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一、效應(yīng)細(xì)胞的制備

激惹5天后，于無菌條件下取出受鼠引流的腹股溝淋巴結(jié)，100目鋼網(wǎng)研磨，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×107.ml-1。臺(tái)盼藍(lán)色要求存活率>95%。

二、靶細(xì)胞的制備

P815細(xì)胞株系DBA/2小鼠的肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞株。連續(xù)傳代培養(yǎng)，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×105/ml或3.33×105/ml（加入α-Lyt2 mAb時(shí)的靶細(xì)胞濃度），臺(tái)盼藍(lán)染色成活率>95%。

三、LDH釋放法測(cè)定CTL的功能

按表1加樣于96孔培養(yǎng)板中，設(shè)3個(gè)復(fù)孔。混勻置二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育4h。室溫離心，用微量加樣器每孔取上清液100μl，送全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定每孔的LDH含量。

表1　LDH釋放法測(cè)定CTL活性的加樣情況（μl）

注：靶細(xì)胞濃度為3.33×105/ml

四、計(jì)算CTL活性

特異殺傷率(%)=(實(shí)驗(yàn)孔LDH值-自然釋放孔LDH值)/(最大釋放孔LDH值-自然釋放LDH值)

五、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

DTH的測(cè)定，4組間比較采用方差分析，兩組比較采用q檢驗(yàn)。對(duì)于CTL的特異殺傷率，先進(jìn)行百分?jǐn)?shù)的平方根反正弦轉(zhuǎn)換后采用方差分析進(jìn)行4組間比較，兩兩比較采用q檢驗(yàn)。

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